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发布时间:2020-2-11 8:35:19  中国威廉希尔娱乐手机版下载处理工程网

  申请日2016.10.08

  公开(公告)日2020.02.04

  IPC分类号C12N1/20; C12N1/16; C02F3/34; C12R1/385; C12R1/46; C12R1/72

摘要:

  本发明公开了一种复合菌剂及其应用,属于工业微生物技术领域。本发明提供的复合菌剂包括铜绿假单胞菌,链球菌,和假丝酵母,分别将所述菌株在各自对应的培养基中进行培养至OD600=1,再按菌液体积比为5:3:2进行混合。将本发明的菌剂以5~10%的接种量接种至油脂威廉希尔娱乐手机版下载中反应48h后,油脂降解率达90.2%,能够在工业上进行规模化应用,具有投入小,效率高,无二次污染等优点。

  权利要求书

  1.一种降解油脂废水中油脂的复合菌剂,其特征在于,包括铜绿假单胞菌、链球菌、假丝酵母,所述菌剂是将驯化后的铜绿假单胞菌、链球菌、假丝酵母分别培养至OD600=1~1.2,再以5:3:2的体积比将菌液进行混合;所述铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)BBE,其保藏编号为CCTCC NO:M 2011185;所述链球菌为链球菌(Streptococcus equi subsp. zooepidimicus)WSH-24,其编号为ATCC 35246;所述假丝酵母为假丝酵母(Yarrowia lipolytica)WSH-Z06,其保藏编号为CCTCC NO:M 20714;具体的,所述复合菌剂通过以下方法制备:

  将所述铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌进行驯化;所述驯化是在驯化培养基中进行;所述驯化培养基成分为:(NH4)2SO4 0.5 g/L,NaCl 0.5 g/L,K2HPO40.3 g/L,MgSO4·7H2O 0.2 g/L,蛋白胨 1.0 g/L,以5 d为培养周期,驯化培养基中的大豆油浓度依次增加至1 g/L、2 g/L、 3 g/L、 4 g/L进行驯化,将驯化后的铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌分别接种至相应基础培养基进行培养,使其OD600=1~1.2;再将驯化后的铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌们的培养液以5:3:2的比例混合,制备复合菌剂。

  2.一种降解油脂废水中油脂的方法,其特征在于,向油脂废水中加入权利要求1所述复合菌剂,在30℃下反应10~60 h,所述复合菌剂的添加量按体积比为5%。

  3.权利要求1所述菌剂在油脂废水处理中的应用。

  说明书

  一种复合菌剂及其应用

  技术领域

  本发明涉及一种复合菌剂及其应用,属于工业微生物技术领域。

  背景技术

  在我国,水污染仍是一个严峻的问题。工业废水、城市生活废水排量都很大。全国地下水受到点状或面状的污染。油脂废水主要来源工业、农业、运输和生活废水排放。油脂覆盖在水体表面,阻断空气中的氧向水体扩散,从而使水体自净能力下降,水中生态平衡遭到破坏。目前。处理油脂废水的方法主要有物理法、化学法和生物法。物理法主要是根据水和油互不相容,密度不同,利用重力和离心力将两者分散,如重力分离法、粗粒化法、过滤吸附法、膜分离法等等。化学法主要是利用化学物质对废水中的有机物进行化学分解,对有用有机物质造成损失,也容易造成二次污染。常用方法有化学破乳除油和化学氧化等。生物法处理油脂废水主要是利用微生物将油脂水解成甘油、脂肪酸,最终分解氧化成水喝二氧化碳等产物。生物法处理废水中的油脂具有投入小,效率高,无二次污染等优点。

  发明内容

  本发明的第一个目的是提供一种复合菌剂,包括铜绿假单胞菌,链球菌,假丝酵母,所述菌剂是以5:3:2的体积比将分别培养至OD600=1~1.2菌液进行混合。

  在本发明的一种实施方式中,所述复合菌剂由铜绿假单胞菌为铜绿假单胞菌BBE,链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06组成。

  在本发明的一种实施方式中,所述铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌们经过驯化;所述驯化是在驯化培养基中进行;所述驯化培养基成分为:(NH4)2SO40.5g/L,NaCl 0.5g/L,K2HPO40.3g/L,MgSO4·7H2O 0.2g/L,蛋白胨1.0g/L,豆油1~4g/L。

  本发明的第二个目的是提供所述菌剂的制备方法,是将铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06分别接种至培养基,于30℃条件下培养至菌体浓度为OD600=0.1;然后将铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06细胞液们以5:3:2比例混合。

  在本发明的一种实施方式中,将所述铜绿假单胞菌BBE接种至LB培养基中进行培养。

  在本发明的一种实施方式中,将所述链球菌WSH-24接种至马铃薯蔗糖培养基中进行培养。

  在本发明的一种实施方式中,将所述假丝酵母WSH-Z06接种至含有酵母粉5g/L,蛋白胨10g/L,无水葡萄糖20g/L的培养基中进行培养。

  本发明的第三个目的是提供一种降解油脂废水中油脂的方法,是向油脂废水中加入所述复合菌剂,在30℃下反应10~60h。

  在本发明的一种实施方式中,所述复合菌剂的添加量按体积比为5~10%。

  本发明还提供所述菌剂在威廉希尔娱乐手机版下载处理中的应用。

  本发明的有益效果:本发明提供了一种复合菌剂,能够有效降解油脂废水中的油脂。将本发明的菌剂接种至油脂废水中反应48h后,降解率达90.2%。

  具体实施方式

  油脂降解率的测定:

  采用UV-2450型紫外-可见光分光光度计对反应液中油脂含量进行测定。取反应液10mL,加1.5mL硫酸酸化后转入分液漏斗,取5mL甲苯加入分液漏斗,震荡后静置分层萃取。将萃取过后的水样到回原分液漏斗中,加5mL甲苯重复萃取一次。将萃取液混匀用甲苯稀释,在324nm波长下测定萃取液的吸光值。根据油脂与吸光值的标准曲线可计算出油脂的浓度。

  培养基:

  驯化培养基(g/L):(NH4)2SO4 0.5,NaCl 0.5,K2HPO4 0.3,MgSO4·7H2O 0.2,蛋白胨1.0,豆油浓度从1g/L依次增加到4g/L。

  检测培养基(g/L):(NH4)2SO4 5.0,Na2HPO4 2.0,K2HPO4 2.0,NaCl 2.0g,MgSO40.5,大豆油20mL。

  LB培养基(g/L):酵母粉5,蛋白胨10,氯化钠5,用于培养铜绿假单胞菌。

  马铃薯蔗糖培养基(g/L):马铃薯200,蔗糖20,用于培养链球菌WSH-24。

  假丝酵母WSH-Z06基础培养基(g/L):酵母粉5,蛋白胨10,无水葡萄糖20。

  实施例1复合菌剂的制备

  1、菌株的驯化:将铜绿假单胞菌BBE(保藏编号CCTCC NO:M 2011185)、链球菌WSH-24(购自ATCC,其编号为ATCC 35246)和假丝酵母WSH-Z06(保藏编号为CCTCC NO:M 20714)分别接种至不含大豆油的驯化培养基中,以5d为培养周期,驯化培养基中的大豆油浓度依次增加至1g/L、2g/L、3g/L、4g/L进行驯化,将驯化前后的菌液分别在检测培养基中反应,测定油脂降解效果,结果如表1所示。经过驯化,假丝酵母WSH-Z06油脂降解率提高至78.2%,铜绿假单胞菌BBE和链球菌WSH-24的油脂降解率分别提高至50.1%和43.9%。

  2、将驯化后的铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌分别接种至相应基础培养基进行培养,使其OD600=1~1.2。

  3、将铜绿假单胞菌BBE、链球菌WSH-24和假丝酵母WSH-Z06菌们的培养液以5:3:2的比例混合,制备复合菌剂。

  表1三株菌驯化前后菌株的油脂降解率(%)

  实施例2复合菌剂降解油脂废水

  按实施例1的步骤制备复合菌剂,其区别在于,不对菌株进行驯化。将菌剂以5%的添加量接种至油脂废水中,于30℃反应48h,计算降解率。结果显示,未经驯化制备的菌剂对油脂的降解率达63.5%.

  实施例3复合菌剂降解油脂废水

  将实施例1制备的菌剂分别以不同添加量接种至油脂废水中,于30℃反应48h,计算降解率,结果如表2所示。将菌剂以5~10%的体积比进行接种,油脂降解率达80%以上,具有显著的效果。

  表2不同条件下油脂降解率

  虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。(发明人:崔明虎;徐彬;郑展望;陈坚;周景文;曹晓梅)

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